自1986年第一款鼠源单抗药物OKT3上市以来，已有90余款抗体药物获批上市，抗体药物已然成为制药领域的重要组成部分。表达抗体的细胞株是抗体药物大规模工业化生产的基础，细胞株的合规性、表达量、表达产物质量、稳定性是衡量细胞株的4个关键指标。细胞株的抗体表达量关系到制药企业的生产成本以及产能；表达抗体的质量关系到抗体药物的安全性、有效性、免疫源性、PK/PD；细胞株的稳定性关系到能否持续稳定的生产出符合质量要求的抗体药物。获得稳定高产的工程细胞系，有利于简化下游纯化工艺，降低整个生产工艺的成本，确保获得高品质的抗体药物。

工业生产用细胞株构建平台概述

三优工业生产用细胞株构建平台致力于为全球客户提供快速高效、合规、高表达量、高质量、稳定性良好的生产用细胞株。可以根据客户的需求，进行基因优化、载体构建、细胞转染、细胞池筛选、单细胞克隆及筛选、细胞库构建和稳定性评估。平台实行cGMP标准，仅需约3.5月即可获得稳定高表达的高质量细胞株，表达量 ≥ 6 g/L。团队成员项目经验丰富，已有近20个工业细胞株的构建及鉴定经验。

服务亮点

1. 高产：表达量≥6 g/L

(1) 采用GS高表达筛选系统, 多种高表达细胞株可供选择。

(2) 进行板式反应器、管式反应器、摇瓶、发酵罐等多重筛选体系。

2. 稳定：2轮稳定性评估确保高稳定性

两轮稳定性评估包括早期稳定性评估和正式稳定性评估，确保所选细胞株的高稳定性。

3. 高质量：系统全面的表达产物质控、细胞库检定和稳定性评估

17项细胞库检定指标，11项表达产物质控指标，9项细胞稳定性检测指标，以上检测结果综合指导克隆筛选，获得高质量细胞株。

4. 合规：cGMP标准；种子细胞符合cGMP规范

(1) 各项文档记录清晰可追溯，确保种子细胞来源清晰、细胞株传代记录清晰、细胞库构建及检定记录清晰。

(2) 细胞株的单克隆源性符合法规要求，影像资料完整。

(3) 细胞库构建符合cGMP标准。

5. 快速：获得稳定高产单克隆细胞株仅需约3.5个月

约3.5个月时间即可获得稳定高产的可用于治疗产品开发的生产用单克隆细胞株。

服务特性

1. 多种高表达细胞株可供选择

多种来源清晰，经过严格质控的GMP种子细胞株可供选择，包括Thermo授权的Freedom CHO-S, Horizon授权的HD-BioP3 Null CHO K1 与QuaCell授权的CHO-K1Q等。

2. 多重筛选体系

基于板式反应器、管式反应器、摇瓶、发酵罐等多重筛选体系，确保获得高表达细胞株。

3. 两轮稳定性评估

两轮稳定性评估包括早期稳定性评估和正式稳定性评估，均从细胞株传代稳定性、细胞生长稳定性、抗体表达稳定性、基因序列一致性和基因拷贝数稳定性这5个维度共计9个指标进行充分评估，确保所选细胞株的高稳定性。

4. 高品质表达产物

从纯度及浓度测定、一级结构分析、亲和力及亲和动力学这3个维度共计11项检测指标对细胞株构建的不同时期的表达产物进行全面质量评估，严格控制产物质量。

5. 细胞株的单克隆源性符合法规要求

(1) 配备先进的C.Sight单细胞打印系统替代传统的手工铺板，单克隆率由30%左右提高到95%以上；

(2) 配备先进的Cell Metric单克隆成像仪通过高清成像追溯单克隆细胞株，确保100%单克隆性。

6. 细胞株建库符合cGMP标准

(1) MCB和WCB在C级背景下的局部A级环境下建库；

(2) 建库的细胞株均单独存放，避免混淆和交叉污染；

(3) 7×24小时的全天候细胞库监控管理；

(4) 标准操作规程、批生产记录等文件体系符合法规要求。

7. 全面的细胞库检定，排除潜在的生物安全隐患

MCB和WCB的库检定均委托具有资质单位从细胞鉴别，细菌、真菌检测，分枝杆菌检测，支原体检测，内外源病毒污染检测这5个维度进行检定。

(1) MCB检定：5个维度共计17项指标；

(2) WCB检定：5个维度共计9项指标。

8. 先进的设施设备

(1) C+A级GMP洁净区

(2) 先进仪器设备

◆ CloneSelect C.Sight

◆ Cell Metric单克隆成像仪

◆ Maurine 双功能蛋白表征分析系统

◆ Probelife Gator非标记生物分析仪

◆ BD LSR Fortessa

◆ Waters ACQUITY UPLC-H-Class Plus

◆ Agilent 1260 HPLC

◆ Thermo 液氮存储箱7401

◆ GE AKTA Pure

案例展示

1. Top pools的24深孔板筛选

挑选48个表达量较高的pool细胞株进入24深孔板，进行8-12天的Fed-batch培养，每48小时取样，检测细胞活率和密度，培养结束检测抗体表达量，并根据表达量和活细胞密度积分值计算Qp值。筛选结果如Fig. 1所示，多个pool细胞株在24深孔板中表达量达到2.5 g/L以上，Qp达到30 pg/cell/day以上。

Fig. 1 细胞株在24深孔板中的表达量（Titer）与Qp

2. Top clone摇瓶培养

Top clone细胞株接种到培养基中进行摇瓶Fed-batch培养，定期取样，检测活细胞密度、细胞活率、表达量以及乳酸、铵等代谢数据，检测结果如Fig. 2所示。细胞株活细胞密度最高可到20.8 ×10⁶ cells/mL，培养15天后，细胞活率仍可维持在78%，抗体表达量可达6 g/L，乳酸和铵离子始终维持在相对较低水平（乳酸＜2 g/L，铵离子＜10 mM）。