技术背景

平台介绍

应用案例

服务流程

关联服务

技术背景

近年来,单克隆抗体是所有药物产品中增长最快的类别之一。从1986年全球第一个治疗肾移植排斥反应的鼠源化抗体OKT3宣告上市,到2017年,欧美市场共批准了至少79种抗体类治疗药物,其价值早已超过上百亿美元。这些抗体药物涉及多种适应症,包括癌症,传染病,过敏,自身免疫疾病以及炎症等。

目前,已上市的单克隆抗体药物主要有以下几种形式,分别是:

1. 鼠源抗体 - 100%的小鼠蛋白质

2. 人鼠嵌合抗体 - 约65%的人源蛋白和35%的鼠源蛋白      

3. 人源化抗体 – 约95%的人源蛋白和5%的鼠源蛋白     

4. 全人源抗体 - 100%的人类蛋白质

由此可见,全人源化抗体是未来抗体药的主流发展趋势。然而全人源抗体库筛选候选抗体时易存在亲和力不足、难以获得具有种属交叉活性的抗体等局限,故小鼠免疫也不失为一种可选择的重要的抗体获得方式。为了获得数量更多、质量更优的候选抗体,三优隆重推出磁阵列免疫抗体库。


平台介绍

磁阵列免疫抗体库(Magnetic & Immunization & Tandem antibody library) ,是采用小鼠免疫、阵列化建库与磁珠高通量筛选技术相结合的抗体制备方法。该方法实施流程如下:


01
抗原的选择与鉴定                                    

可选多种类型抗原进行免疫,根据具体项目需求,选择鉴定明确的蛋白、多肽、细胞或DNA等作为免疫原。


02

动物免疫                                               

通常优选3-15只小鼠,根据抗原特性进行多点、多途径、多种属免疫原交叉免疫等,从而获得具有高效价抗体的免疫小鼠。


03

阵列化噬菌体展示库构建                             

取多只小鼠脾脏,分离RNA,并通过随机引物反转录得到cDNA,再通过数十组引物,扩增出所有抗体基因,然后将轻、重链抗体基因插入噬菌体展示载体,构建出阵列化的抗体库。



04
磁珠高通量筛选                                        

将目标抗原偶联到磁珠上,然后采取磁珠高通量筛选仪完成3-4轮海选,再挑取大量克隆进行亲和筛选,将所获阳性抗体克隆送交测序,从而获得序列明确的、高亲和力的先导抗体。

平台优势

抢占市场先机,较杂交瘤节省3个月

本产品在建库和筛选环节仅需2个月,和杂交瘤技术的筛选环节相比,时间缩短了近3个月!


抗体序列明确,无后顾之忧

本产品采用基因工程和噬菌体展示技术,可直接获得抗体的基因序列。


多点多种类免疫,抗体数量多

本产品选择多种类小鼠,多种类免疫方法,多种类、多种属免疫原交叉免疫,易获得有人、猴交叉活性的候选分子。采用多组建库方法及多种类筛库策略,单一靶点可获得数十至上百个候选分子。


亲和力高,更利功能筛选

本产品获得的候选分子,比杂交瘤源的候选分子亲和力更高,更有利于后期的功能筛选及动物实验。


应用案例

所获抗体数量多

通过MIT免疫库的海选、初筛、测序分析及复筛,共获得了60余个具有独特序列的先导抗体。

所获得抗体的亲和力排序实验结果如图1所示。由图可知,该项目所获先导抗体与抗原结合的EC50值大部分在sub-nM级别。

图1. MIT 免疫库所获抗体的亲和力排序

所获抗体亲和力更高

通过MIT免疫库和杂交瘤技术分别制备了某靶点蛋白的候选抗体。两种技术所获抗体的亲和力比较实验结果如图2所示。

图2. MIT免疫库与杂交瘤技术来源的抗体亲和力排序

由图可知,从MIT免疫库来源的优选抗体克隆B1、B3和C4的亲和力显著高于从杂交瘤来源的优选抗体JK系列。

获得抗体具有种属交叉活性

通过MIT免疫库获得的候选抗体,通过ELISA检测种属活性见图3。由图可知,A候选抗体具有明显的人、猴交叉活性,以及较低的鼠交叉活性。

图3. MIT免疫库所获抗体种属交叉活性检测

更适流式等所需抗体的开发

将高表达靶细胞依次与不同浓度的候选抗体及荧光二抗进行孵育,随后采用流式细胞仪分析候选抗体的结合活性。实验结果见图4,5和表1。由图可知,两种筛选均获得了适用于流式分析的抗体。另由表1可知,MIT免疫库来源的P4-C和P4-D的亲和力明显高于杂交瘤的优选抗体P4-F和P4-G.

图4. MIT免疫库来源抗体的流式筛选案例

图5. 杂交瘤技术来源抗体的流式筛选方案

表1. 流式筛选抗体的EC50汇总

1.免疫方法及免疫原种类丰富

2.采用噬菌体展示技术建库

3.高通量筛选

三优的MIT免疫库技术成熟,平台人员经验丰富,已经形成良性稳定的优化体系。截至2019年3月,三优已累计构建352个MIT免疫库,累计库容达到4.0 ×1010。三优MIT免疫库已累计服务30余个项目,共计获得770个优质候选分子。

服务流程

益处

您可以提供任意形式的蛋白、多肽、细胞或DNA抗原,或仅提供抗原序列信息,或仅提供未知序列的抗原。


您将可以获得至少几十个候选抗体!


您将可以获得亲和力至少nM级别的候选抗体!

 

您将可以直接获得优选抗体的确切序列!


关联服务

多种抗体库组合,
只为一个最优抗体。

三优生物利用噬菌体展示技术,打造了磁阵列免疫抗体库,超千亿全人抗体库,超千亿单域抗体库等针对不同需求的多种抗体库服务。利用抗体库筛选抗体,可以从数亿抗体分子中选出顶级亲和力抗体,特异性更高的优选抗体,为抗体药物研发奠定最坚实的基础。

极致抗体工程改造,
带来非凡体验。

三优生物利用基因工程抗体库技术,对候选抗体的CDR区进行定点突变、组合突变、随机突变等抗体工程改造。从而可以打造出具有极致亲和力的改造抗体,提高待选抗体与抗原亲和力。

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