服务概览

服务亮点一

服务亮点二

服务亮点三

服务亮点四

服务亮点五

服务亮点六

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服务概览

Service overview

各关键环节的技术先进

1)关键环节一:抗原制备。可融蛋白、真核细胞、DNA、膜蛋白等多种抗原制备方式保证抗原的高品质。

2)关键环节二:抗体产生。含有大容量噬菌体展示全人抗体库、免疫抗体库、杂交瘤等多样化的抗体筛选方式,可获得数十个序列明确,亲和力高的优选抗体候选分子。

3)关键环节三:抗体工程改造。基于3D深度人源化获得的抗体,人源化程度达到90%以上,且有抗体成药性保障。基于大容量噬菌体展示抗体库的亲和力成熟技术,对所获得的抗体候选分子进行极致优化,通常亲和力可达到5-100倍的提升。

4)关键环节四:体系化体外药效筛选。三优生物已建立体系化的单克隆抗体药物的生物学活性评价方法,包括ADCC、CDC、细胞增殖抑制、免疫细胞共刺激、巨噬细胞吞噬等各种筛选方法,可实现高效、高通量筛选。

5)关键环节五:成药性筛选。将高表达细胞株制备、稳定性研究、理化分析、动物药效筛选整合在一起,确保了临床前候选分子的品质。

服务亮点

Service highlights

服务亮点一:磁阵列(MIT)免疫抗体库

磁阵列免疫抗体库( MIT,Magnetic & Immunization & Tandem antibody library)是动物免疫、阵列化建库与磁珠高通量筛选技术相结合的抗体制备方法。

应用案例一:所获抗体数量极多

通过海选、初筛、测序分析及复筛。通过MIT免疫抗体库,共获得了60余个具有独特序列的先导抗体。 所获抗体的亲和力排序实验结果如图1所示。由图可知,该项目所获先导抗体与抗原结合的EC50值大部分在sub-nM级别。


应用案例二:所获抗体亲和力更高

通过MIT免疫抗体库和杂交瘤技术分别制备了抗某靶点蛋白的候选抗体。两种技术所获抗体的亲和力比较试验结果如图2所示。由图可知,从MIT免疫抗体库来源的优选抗体克隆B1、C4、和B3的亲和力显著高于从杂交瘤来源的优选抗体。

图1.MIT免疫抗体库所获抗体的亲和力排序

图2.MIT免疫抗体库与杂交瘤技术来源的抗体的亲和力比较

丰富的经验

三优生物在磁阵列免疫抗体库积累了大量的成功案例。至2018年1月,三优生物已经成功构建了298个磁阵列免疫抗体库。

此外,三优生物在其他抗体库方面也积累了大量的经验:包括6个人源疾病抗体库、50个亲和力成熟抗体库、28个天然库子库和53个Fab抗体库。积累库容量达1011

表1.三优生物所构建抗体库的数量库容和总结

截止2018年1月

技术先进集成化、流水式抗体库构建平台

保证MIT抗体库服务的品质

服务亮点二:上千例样本构建的超千亿全人抗体库

目前,世界上已经构建的噬菌体展示抗体库包括全人天然抗体库、合成抗体库和半合成抗体库等。大多数抗体库仅仅采用几十个供体或合成的抗体基因构建而成,存在库容量低、多样性不足、表达比例低、错配比例高、成药性不足等缺陷,极大的限制了其应用。为了解决上述问题,三优生物利用自己的优势平台,收集了四千余例样本,打造了世界领先,库容超千亿级的全人天然抗体库。

为什么选择全人天然抗体库?

噬菌体展示抗体库技术有多种杂交瘤技术难以比拟的优点

噬菌体展示全人抗体库是已被广泛证明的技术。目前,已上市的20多个全人抗体中,有8个抗体药物是从噬菌体展示全人抗体库中筛选获得的。

表2.三优生物天然库与国际知名抗体库的比较

应用案例一: 现有百亿级天然抗体库通过20多个靶点进行了验证,每个靶点可获得5-25个先导抗体

通过海选、初筛、测序分析及复筛。通过全人天然抗体库,共获得了20余个具有独特序列的先导抗体。

所获抗体的亲和力排序实验结果如图4所示。由图可知,该项目所获先导抗体与抗原结合的EC50值大部分在sub-nM级别。

图3.全人天然抗体库所获抗体的亲和力排序

图4.全人天然抗体库所获抗体的亲和力排序

服务亮点三:极致抗体工程改造、成药性的保证

3D抗体人源化是指通过计算机辅助进行鼠源抗体人源化设计,并基于晶体结构分析,对异源抗体表面氨基酸残基进行人源化改造。最大程度对鼠源抗体进行深度人源化,人源化程度达到90%以上。

应用案例一:人源化后亲和力基本保持和鼠源抗体一致,部分抗体人源化后亲和力高于鼠源抗体

通过对所获抗体进行人源化改造。

所获人源化改造后的抗体亲和力测定结果如图5所示。由图可知,人源化后的抗体亲和力基本保持和鼠源对照抗体一致,部分抗体人源化后亲和力高于鼠源对照抗体。

图5.人源化抗体与鼠源抗体的亲和力比较

图6.人源化抗体与鼠源抗体的晶体结构模拟

通过计算机辅助模拟,选择待改造的CDR组合,通过科学系统的方法,设计出数亿乃至数百亿的突变抗体库,通过海选、亲和筛选、序列分析、亲和动力学分析、表达特性分析和理化性质分析,筛选出具有更高亲和力、更高成药性的优选抗体。

高亲和力保障:对原序列进行数亿乃至数十亿氨基酸位点的优化,通过层层筛选,通常可使抗体亲和力带来5-100倍的大幅提升。

先进技术集合 :集合了3D高级结构模拟、大容量抗体库、理化分析等先进技术。

应用案例二:极致亲和力成熟改造亲和力提升20倍

通过对所获抗体进行亲和力成熟改造。

所获抗体的亲和力成熟改造实验结果如图7所示。由图可知,该项目通过1轮突变,亲和力可以提高5-10倍,通过两轮突变,亲和力可以提高20倍以上。


应用案例三:PH敏感型项目成功获得多个候选抗体

通过对所获PH敏感型抗体进行亲和力成熟改造。

所获抗体的亲和力成熟改造实验结果如图8所示。由图可知,通过1轮突变,与野生型相比,筛选到了PH6.0和7.2结合特性有显著的差异的抗体。

图7.极致亲和力成熟改造

图8.PH敏感型项目极致亲和力成熟改造

服务亮点四:体系化体外药效评价胜任各类靶点的抗体药物筛选

抗体类药物的细胞功能学检测在药物筛选和质量控制中至关重要。目前抗体药物的活性分析方法主要是生化水平的和细胞水平的功能学筛选。三优生物已建立体系化的单克隆抗体药物的生物学活性评价方法,可胜任细胞毒性、抑制细胞增殖、调节细胞的激活和相互作用、调节人自身免疫系统、中和抗原、GPCR等各类靶点药物筛选。使抗体药物开发进入临床前仅距一步之遥!

体系化体外药效评价概览

应用案例一:分选出人原代细胞纯度极高,适用于抗体功能筛选

使用德国美天旎MACS系统分选人原代总T细胞(阴选)、CD4+T细胞(阴选)和单核细胞后,分别使用CD3,CD4和CD14流式抗体对分选出的细胞进行标记,并用流式细胞仪检测。结果如图9所示。由图可知,分选出人原代细胞纯度极高,可适用于抗体功能筛选。

图9.人源代细胞分离实验

应用案例二:FACS 亲和力筛选部分候选抗体分子与阳性对照抗体的亲和力在同等水平

将待测细胞先后与不同浓度梯度的候选抗体分子和荧光二抗孵育,随后使用流式细胞仪检测候选分子亲和力。结果如图10所示。由图可知,候选抗体分子中有部分分子与阳性对照抗体的亲和力在同一个水平。

图10.FACS亲和力筛选实验

应用案例三:共刺激培养实验所获抗体克隆的生物学活性显著优于对照抗体

用对照抗体和不同浓度的候选抗体共刺激培养人原代T细胞,Elisa检测培养后的细胞上清中细胞因子分泌量。结果如图11所示。由图可知,候选抗体可有效激活T细胞反应。

图11.共刺激培养实验

应用案例四:流式检测巨噬细胞吞噬靶细胞的效率

通过诱导人单核细胞为巨噬细胞,将靶细胞与巨噬细胞以及不同浓度梯度的抗体A及候选抗体共孵育,流式检测巨噬细胞吞噬靶细胞的效率。结果如图11所示。由图可知,候选抗体和抗体A均可有效促进巨噬细胞吞噬靶细胞,且其中有2个候选抗比阳性对照抗体好。

应用案例五:分选出所得抗体可有效增强免疫效应

将分选出的单核细胞体外诱导为巨噬细胞,与不同人CD4+T细胞以一定比例铺板并向其中加入不同浓度梯度的目标抗体。结果如图13所示。由图可知,抗体可有效增强免疫效应。

图12.流式检测巨噬细胞吞噬靶细胞的效率

图13.混合淋巴细胞反应实验

服务亮点五:针对于同一个靶点不同表位或不同靶点筛选获得共同轻链抗体的需求

三优生物的共同轻链噬菌体展示文库(Commonlight chain library)选择了代表性的人源轻链germline序列,和来源于百亿级PBMC的人源重链序列组合,构建了百亿级的共同轻链Fab抗体库。除此之外,三优在人源重链序列基础上构建人源CDR3的半合成共同轻链抗体库,进一步扩大文库重链的多样性。

三优生物共同轻链噬菌体展示文库,通过筛选验证,不同的靶点均能获得数十个binder。能够满足客户针对于同一个靶点不同表位或不同靶点筛选获得共同轻链抗体的需求,而且,获得的共同轻链抗体为全人源抗体,可直接用于双特异抗体开发。




  1. 所获抗体轻链序列相同,可以直接构建为双特性抗体进行验证。
  2. 共同轻链双抗与人体内的IgG抗体分子形式保持一致,在成药性和生产工艺的控制上具有优势。
  3. 所获抗体为全人源抗体序列。
  4. 针对不同靶点均能筛选到数十个全人源共同轻链抗体。

服务亮点六:拥有独立知识产权的单域抗体产生平台,有望为全世界的抗体制药公司提供早期的单域抗体优效分子。

三优拥有世界领先的抗体库技术,拥有形式多样的抗体库, 其中羊驼单域抗体的免疫库和天然库构建及筛选,已得到部分项目验证。此外,超万亿级羊驼半合成和合成库目前正在构建当中。

相较于其它类似的抗体产生平台,三优单域抗体平台表现出极高的优势,具体表现如下:


抗体筛选流程


对于羊驼免疫库,通常通过2-3轮的抗体海选可以得到超过100个具有独特序列的阳性克隆,它们的亲和力通过Fortebio测得可达pM水平。部分阳性克隆的Elisa水平亲和力排序结果如Fig. 1所示。


Fig. 1 Affinity ranking of the candidates screened out from alpaca-derived immune library by ELISA method

► 多种抗体库形式

► 液相高通量筛选

► 每个靶点可筛到超百个binder

► 抗体序列明确

► 高亲和力

三优生物已经建立了一系列的抗体筛选方法,比如免疫管固相筛选,磁珠液相筛选和细胞筛选。客户可根据抗原的性质选择任意一种方法进行筛选。Fig.2 所示为磁珠液相筛选的流程图。


  Fig. 2 The process how we screen out the candidates from our library against the interested antigen.

案例一


背景介绍


蛋白X2和X1在序列上高度相似,只有几个氨基酸你的差别,因此筛选到特异性结合蛋白X2,不结合X1的抗体非常困难。


Fig. 3a

                Fig. 3b

Fig. 3 Specificity test of the candidate antibodies by FACS binding on X2 stable cell line (Fig. 3a) and X1 stable cell line (Fig. 3b)


Fig. 4 Complement-Dependent Cytotoxicity (CDC) effect of one of the screened lead antibody and reference antibody (pAb)

Fig. 5 antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) effect of one of the screened lead antibody and reference antibody (pAb)


结果


1. 通过羊驼免疫库筛选得到120个识别蛋白X2的抗体,其中超过40个抗体特异性结合蛋白X2,不结合蛋白X1。

2. 其中有部分抗体在细胞功能实验上的表现和对照抗体一致甚至更优。抗体在阻断实验中优于目前上市的对照抗体。

案例二


背景介绍


此配体有两个对应的受体,成功开发针对此配体的抗体而且同时阻断两个受体的结合非常困难。


Fig. 6. Affinity ranking of the candidates screened out from alpaca-derived immune library by ELISA method

Fig. 7. Blocking effect of the antigen binding with its receptor 1 by ELISA method


Fig. 8. Blocking effect of the antigen binding with its receptor 2 by ELISA method



结果


从羊驼免疫库和天然库筛选到的抗体当中,有30%的抗体能够同时阻断此配体和两个受体的结合。而且部分抗体在阻断实验中优于目前上市的对照抗体。

服务详情

Service details

通过四个里程碑获得成药性良好的候选分子。

服务模式

三优生物的可采用整体外包、里程碑合作开发、个性化服务等多种灵活的服务模式。让客户风险减半,成功加倍。

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